Question
En cours de résolution
Avant de séparer une protéine dans du sérum par méthode de relargage par du sulfate de sodium, nous devons mélangé un volume de sérum avec le même volume de PBS puis faire chauffer à 25 degrés. A quoi cela sert-il ?
1 Réponse
Le mélange de sérum avec un volume égal de PBS (phosphate buffered saline) suivi d'un chauffage à 25 degrés Celsius avant le relargage par du sulfate de sodium sert plusieurs objectifs techniques dans la purification des protéines.
1. **Stabilisation du pH et des ions** : PBS est une solution tampon qui maintient un pH stable et une concentration ionique constante. Cela est crucial pour éviter la dénaturation des protéines et pour garantir que le relargage se fait sous des conditions optimales. La stabilité ionique favorise également l'interaction avec des agents précipitants comme le sulfate de sodium.
2. **Réduction de la viscosité** : Le mélange avec PBS réduit la viscosité du sérum, permettant une manipulation plus facile et homogène de la solution, ce qui est essentiel pour une précipitation uniforme lors du relargage.
3. **Pré-dilution** : La dilution du sérum avec PBS aide à réduire la concentration des protéines, permettant un contrôle plus précis du processus de précipitation. Une concentration protéique trop élevée pourrait conduire à une précipitation non spécifique ou une agrégation protéique.
4. **Température de Pré-Conditionnement** : Chauffer la solution à 25 degrés Celsius standardise la température de la solution. Cela est important parce que la solubilité des protéines et des sels comme le sulfate de sodium est sensible à la température. Une température contrôlée garantit que les conditions de relargage sont reproductibles.
5. **Préparation pour le Relargage** : Le chauffage à 25 degrés Celsius peut également faciliter la dissociation de complexes protéiques ou la dénaturation partielle de protéines contaminants qui pourraient interférer avec le processus de relargage. Cela peut améliorer la sélectivité de la précipitation.
Pour la purification de protéines spécifiques, après cette étape préparatoire, vous pourriez utiliser des kits de purification comme le **GeneClean® Turbo Kit** si vous avez besoin de purifier des fragments d'ADN après une analyse d'expression génétique, ou d'autres kits de purification pour ARN si l'objectif est l'analyse transcriptionnelle (par exemple, le **SPINeasy RNA Kit**). Cependant, pour la purification de protéines, des systèmes spécifiques comme des colonnes de chromatographie ou des kits de précipitation protéique peuvent être plus appropriés.
1. **Stabilisation du pH et des ions** : PBS est une solution tampon qui maintient un pH stable et une concentration ionique constante. Cela est crucial pour éviter la dénaturation des protéines et pour garantir que le relargage se fait sous des conditions optimales. La stabilité ionique favorise également l'interaction avec des agents précipitants comme le sulfate de sodium.
2. **Réduction de la viscosité** : Le mélange avec PBS réduit la viscosité du sérum, permettant une manipulation plus facile et homogène de la solution, ce qui est essentiel pour une précipitation uniforme lors du relargage.
3. **Pré-dilution** : La dilution du sérum avec PBS aide à réduire la concentration des protéines, permettant un contrôle plus précis du processus de précipitation. Une concentration protéique trop élevée pourrait conduire à une précipitation non spécifique ou une agrégation protéique.
4. **Température de Pré-Conditionnement** : Chauffer la solution à 25 degrés Celsius standardise la température de la solution. Cela est important parce que la solubilité des protéines et des sels comme le sulfate de sodium est sensible à la température. Une température contrôlée garantit que les conditions de relargage sont reproductibles.
5. **Préparation pour le Relargage** : Le chauffage à 25 degrés Celsius peut également faciliter la dissociation de complexes protéiques ou la dénaturation partielle de protéines contaminants qui pourraient interférer avec le processus de relargage. Cela peut améliorer la sélectivité de la précipitation.
Pour la purification de protéines spécifiques, après cette étape préparatoire, vous pourriez utiliser des kits de purification comme le **GeneClean® Turbo Kit** si vous avez besoin de purifier des fragments d'ADN après une analyse d'expression génétique, ou d'autres kits de purification pour ARN si l'objectif est l'analyse transcriptionnelle (par exemple, le **SPINeasy RNA Kit**). Cependant, pour la purification de protéines, des systèmes spécifiques comme des colonnes de chromatographie ou des kits de précipitation protéique peuvent être plus appropriés.
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Informations :
Postée le : vendredi 16 décembre 2022
Avant de séparer une protéine dans du sérum par méthode de relargage par du sulfate de sodium, nous devons mélangé un volume de sérum avec le même volume de PBS puis faire chauffer à 25 degrés. A quoi cela sert-il ?
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